1 材料与方法
1.1 质控样品 质控菌株是兰州铁路疾病预防控制所统一购买发放的冻干菌株、乳胶管封装完好,编号分别为 43 号和 98 号。
1.2 检验要求 食源性致病菌检测,需要鉴定到种或属。
1.3 主要试剂及仪器 营养肉汤、7.5%氯化钠肉汤、7.5%Nacl 肉汤、SS 琼脂、HE 琼脂、麦康凯琼脂、血平板、Baird-Parker 平板、半固体琼脂、葡萄球菌干制生化鉴定试剂盒、DBI 干制生化鉴定试剂盒系列、革兰氏染液等均购自北京陆桥技术有限责任公司,金黄色葡萄球菌显色培养基、弧菌属显色培养基、沙门氏菌显色培养基、李斯特菌显色培养基等均购自郑州博赛生物技术股份有限公司,所有试剂均在有效期内使用。
1.4 检测方法 按照《食品卫生微生物学检验》[1]GB/T4789-2003,GB/T4789-2008,GB/T4789-2010,GB/T4789-2012 要求进行增菌、分离、染色镜检、生化试验等。
1.5 检测步骤
1.5.1 增菌 以无菌操作开启考核盲样,加入灭菌水中,分别吸取适量于营养肉汤、7.5%氯化钠肉汤中,于 36.5℃培养。
1.5.2 分离培养 用无菌接种环挑取营养肉汤、7.5%氯化钠肉汤液转种于营养琼脂、SS 琼脂、HE 琼脂、麦康凯琼脂、沙门氏菌属显色培养基、金黄色葡萄球菌显色培养基、李斯特菌显色培养基、弧菌属显色培养基、血平板、Baird-Parker平板等置 36.5℃培养 24h.
1.5.3 细菌的革兰染色及生化试验 挑取纯培养的单个菌落进行革兰染色。同时将可疑菌落接种三糖铁琼脂和 SIM 动力培养管中做动力试验,置于 36.5℃培养后观察。挑取可疑菌落进行过氧化氢酶试验,根据不同结果选择相应的生化试验。
2 结果
2.1 增菌培养后 43 号营养肉汤混浊,有菌膜,稍有沉淀;7.5%氯化钠肉汤混浊、有菌膜,管底有沉淀,轻晃可见数条链状物。98 号营养肉汤及 7.5%氯化钠肉汤无混浊、无菌膜、无沉淀。
2.2 分离培养的菌落生长情况。
2.3 染色镜检 挑取血平板上可疑菌落革兰氏染色镜检,结果为G+无芽胞球菌,多数排列成葡萄状,并混有链状排列。挑取李斯特显色培养基可疑菌落进行革兰染色,为G+短小杆菌,用生理盐水制成混悬液,在油镜下可见轻微旋转运动。
2.4 生化试验 挑取血平板上可疑菌落用葡萄球。
菌科细菌生化编码鉴定管做生化试验及血浆凝固酶试验,置 36.5℃培养。血浆凝固酶试验呈阳性反应。挑取革兰阳性短小杆菌、动力阳性的菌落进行过氧化氢酶试验,阳性反应的菌落进行糖发酵、MR-VP、甘露醇、鼠李糖、木糖等生化试验,观察结果。
2.5 实验结果 根据菌落形态特征、染色镜检、生化反应结果,判断 43 号质控盲样检出金黄色葡萄球菌,98 号质控盲样检出单核细胞增生李斯特菌。见表 2、表 3.
3 讨论
食源性疾病是指通过食物进入人体内的致病因子而导致的感染或中毒,大多数食源性疾病是由细菌、真菌、病毒和蠕虫引起。细菌性食物中毒是最常见的一类,致病菌主要有沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、蜡样芽胞杆菌、致病性大肠杆菌、耶尔森氏菌、单增李斯特氏菌等。常见的细菌性食物中毒(如沙门氏菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌等细菌性食物中毒)的发病特点是病程短、恢复快、预后好、病死率低,但李斯特菌、小肠结肠炎耶尔森菌、肉毒梭菌、椰毒假单胞菌食物中毒的病死率相对较高,且病程长、病情重、恢复慢.
金黄色葡萄球菌的致病机理:金黄色葡萄球菌广泛分布于自然界,健康人的皮肤和鼻咽部、化脓灶都有该菌,引起中毒的食品多为奶、肉、蛋、鱼及其制品,剩饭、油煎蛋、糯米糕等。随食物摄入活菌而无葡萄球菌肠毒素不会引起中毒,只有摄入达中毒剂量的该菌肠毒素才会致病。
该菌引起的食物中毒的潜伏期一般为 1h~6h.
主要临床症状有恶心、剧烈反复呕吐、上腹部疼痛、水样便,体温正常或低热。病程短,1d~2d内即可恢复健康,预后一般良好。金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品:食品加工人员、炊事员或销售人员带菌;食品在加工前本身带菌,或在加工过程中受到了污染,产生了肠毒素;熟食制品包装不严,运输过程受到污染:奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓。
单核细胞增生李斯特菌的致病机理:单核细胞增生李斯特菌(LM)广泛存在于自然环境中,是一种重要的人兽共患病的致病菌,也是食品加工生产与存贮过程中对一些食品如奶酪、生肉及肉制品、鸡蛋、蔬菜沙拉、海产品及即食食品造成不同程度污染的主要致病菌之一。该菌作为一种重要的食源性致病菌,能导致侵袭性感染,主要表现为败血症、脑膜炎、孕妇流产、胎儿早产、死产以及新生儿败血症、神经症状及单核细胞增多症等,临床病死率较高,易感人群为免疫力低下人群、幼儿、老年人和孕妇;还能导致非侵袭性感染,主要表现为发热性胃肠炎,通常为正常人群误食了较大剂量被本菌污染的食物所致[3].
此菌具有嗜冷性,4℃以下仍能生长繁殖,而冷荤类等食品在储存过程中,极可能会造成交叉污染和二次污染。
疾控机构实验室的的检验能力是各项卫生防病工作的技术支撑和基础,在传染病及流行病的预警预报、食源性疾病的监测、调查和处理、化学品急性中毒的处理等领域发挥巨大作用,为提出有效方案,快速解决问题提供科学依据[4].通过实验室间质控考核,可使检测人员在质评过程中发现存在的问题,从问题中思考总结,不断改进提高检验技术水平。
参考文献:
[1] 中国人民共和国卫生部。GB/T4789.食品卫生检验方法微生物学[S].北京:中国标准出版社,2007,1.
[2] 孙长颢。营养与食品卫生学[M].北京:人民卫生出社,2007,446.
[3] 高波,霍哲,安希龙,等。食源性单增李斯特菌监测溯源技术研究[J].中国卫生检验杂志,2009,24(15):2185-2187.
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